微量DNA轉染試劑的原理基于細胞攝取外源DNA的能力和DNA分子在細胞內的轉運。試劑中所添加的特定分子可以有效地保護DNA分子,并增加其與細胞膜之間的親和性,從而提高DNA分子被細胞攝取的效率。試劑中的酸性環境和細胞內的酶則能夠促使DNA分子從脂質復合物中被釋放出來,并進入細胞核,實現基因轉染。
將這些DNA脂質復合物添加到目標細胞培養基中。通過一系列的胞內轉運步驟,DNA脂質復合物會與細胞表面的負電荷分子相互作用,形成脂質體和細胞膜之間的親和性。這種親和作用使得DNA脂質復合物能夠與細胞膜相結合,并被細胞攝取。細胞將攝入的DNA脂質復合物轉運至細胞質內。
通過胞內轉運機制,DNA脂質復合物被釋放出來。細胞質中的酸性環境和細胞內酶的作用會導致DNA脂質復合物的穩定性降低,使之解離。DNA分子被釋放到細胞質中,接下來進入細胞核。在細胞核中,DNA分子可以與細胞的基因組相結合,或與核內的蛋白相互作用,從而實現基因表達或基因編輯。
微量DNA轉染試劑主要應用于以下領域:
1.基因功能研究:將外源基因導入細胞內,從而研究基因在細胞內的功能及影響。
2.基因治療:將治療相關的基因載體輸送到目標細胞內,以實現基因治療的目的。
3.基因編輯:將基因編輯相關的工具如CRISPR/Cas9系統導入細胞內,以實現基因編輯。
4.逆轉錄病毒研究:將逆轉錄病毒的基因組導入細胞內,研究逆轉錄病毒感染機制及生命周期。
5.基因表達調控研究:將miRNA、siRNA等轉染到細胞內,研究基因表達調控機制。