Puromycin 嘌呤霉素 PS610使用說明

　　1.轉染前一天鋪HEK293細胞，培養基為含10%FBS的DMEM培養基，以6wellplate為例，細胞數目約為0.5x106cells。

 

　　2.在無菌管中加入目的DNA質粒(1-2ug)及無血清的DMEM或者Opti-MEM。

 

　　3.在無菌管中加入無血清的DMEM或者VGF轉染試劑4-10ug。

 

　　4.將2和3步中的溶液混合，室溫放置20-30min。

 

　　5.將4步所得混合液逐滴加入至6wellplate中。

 

　　6.轉染48h后，吸棄培養基，加入終濃度為1-10ug/mlPLM-Puromycin試劑的培養基2ml。

 

　　7.再培養48h后，觀察細胞狀態，不含嘌呤霉素的細胞會飄起死亡，轉入含嘌呤霉素抗性質粒的細胞則貼壁生長。再次吸棄培養基，加入終濃度為1-10ug/mlPLM-Puromycin試劑的培養基2ml，繼續殺死無嘌呤霉素抗性的細胞。

 

　　8.再培養48h，若細胞仍然貼壁生長且幾乎長滿，結果說明我們的目的質粒含有嘌呤霉素抗性基因，否則目的質粒不含嘌呤霉素抗性基因。

 

　　注意事項：篩選細胞時，細胞接種密度不能過大，以免影響篩選效率。當細胞密度比較大時，可加本試劑反復篩選，直至對照細胞死亡。建議的一般哺乳動物細胞選用的有效濃度范圍為1-10μg/ml,使用前要做濃度篩選，選擇合適的濃度。